абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования).

абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования).

Анемия – клинико-гематологический синдром, который характеризуется снижением концентрации гемоглобина и в большинстве случаев количества эритроцитов в единице объема крови.

Согласно принятым стандартам, анемией считается снижение показателей красной крови: уровня гемоглобина ниже 130 г/л у мужчин и 120 г/л у женщин и количества эритроцитов менее 4,0х1012/л и 3,5х1012/л.

В зависимости от типа и патогенеза анемия может оказаться ведущим синдромом в клинической картине заболевания, определяя его прогноз или сопутствующим состоянием, практически не отражающимся на клинической картине.

Клинические проявления анемии зависят от ее степени и скорости развития снижения гемоглобина

Лабораторная диагностика анемии начинается с выявления ключевого признака: снижения концентрации гемоглобина и, возможно абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования)., эритроцитов в единице объема крови.

Определение количества эритроцитов (RBC = Red Blood Cells).

В настоящее время для определения количества эритроцитов используют два метода: подсчет эритроцитов в счетной камере Горяева и с помощью автоматических счетчиков и анализаторов.

Подсчет эритроцитов в счетной камере проводят под микроскопом в строго определенно количестве квадратов камеры Горяева. После чего делают пересчет числа эритроцитов на 1 мкл и

1 л крови с учетом объема квадратов и разведения крови.

Автоматическое определение количества эритроцитов. Поскольку подсчет количества эритроцитов в камере Горяева представляет собой весьма трудоемкое исследование, в последние годы в клинической практике все чаще используют специальные автоматические счетчики форменных элементов крови и гематологические автоматы абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования)., работа которых основана на различных принципах. Большое распространение получили автоматические приборы, принцип работы которых основан на кондуктометрическом методе. Определенное количество крови, разведенной изотоническим раствором натрия хлорида, пропускают через микроотверствие диаметром 100 мкм, с обеих сторон которого расположены электроды. Проходящая через отверстие клетка крови изменяет сопротивление между электродами, которое и фиксируется электронным устройством.

Характерно, что величина повышения электрического сопротивления зависит от объема клетки и некоторых других характеристик. Это позволяет автоматически рассчитывать не только общее количество эритроцитов, но и измерять объем клеток и некоторые другие показатели.

Трактовка результатов.

Нормальные показатели количества эритроцитов представлены в таблице 1 Приложения.

Факторы и состояния абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования)., приводящие к снижению RBC:

· увеличение объема циркулирующей крови за счет водной части (относительные эритроцитопении);

· уменьшение образования эритроидных клеток в костном мозге (анемии).

Факторы и состояния, приводящие к повышению RBC:

· уменьшение объема циркулирующей крови за счет водной части (относительные эритроцитозы);

· избыточная продукция эритроцитов в костном мозге первичной (опухолевой), либо вторичной природы.

Определение концентрации гемоглобина.

Определение содержания гемоглобина в крови является одним из самых важных и массовых лабораторных показателей. Это важнейший показатель (наряду с подсчетом эритроцитов) для оценки анемических состояний в клинической практике.



Особенности преаналитического этапа.

Заведомо неправильный результат концентрации гемоглобина может быть получен:

· для капиллярной крови – при оказании чрезмерного давления абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). или выжимании крови, что приводит к выходу межклеточной жидкости, разбавляющей пробу и получению ошибочно низкой концентрации гемоглобина;

· для венозной крови – при наложении жгута на руку более чем на одну минуту, что приводит к пролонгированному сосудистому стазу и ошибочно высокой концентрации гемоглобина;

· при использовании негомогенной пробы, полученной при недостаточном перемешивании;

· при липидемии.

Особенности аналитического этапа.

Для определения концентрации гемоглобина чаще всего анализируют производные гемоглобина, образовавшиеся в процессе его окисления и присоединения к гему различных химических групп, приводящих к изменению валентности железа и окраски раствора.

Унифицированый гемоглобинцианидный метод.

Принцип метода: основан на переоде всех форм гемоглобина (Hb) в одну – HbCN (цианометгемоглобин, гемиглобинцианид). Перевод абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). Hb в HbCN осуществляется при его взаимодействии с транформирующим раствором, содержащим феррицианид калия, цианид калия, дигидрофосфат калия и неионный детергент. Дигидрофосфат калия поддерживает уровень рН, при котором реакция проходит за 3 – 5 минут. Детергент усиливает гемолиз эритроцитов и предотвращает мутность, связанную с белками плазмы. Феррицианид калия окисляет все формы Нb в метгемоглобин, который образует с цианистым калием HbCN, имеющий красноватый цвет, интенсивность которого прямо пропорциональна концентрации Hb в пробе.

Гемиглобинцианидный метод был одобрен Международным Комитетом по стандартизации в гематологии ( ICSH) в 1963 г. В нашей стране гемиглобинцианидный метод был рекомендован к применению Министерством здравоохранения в 1974 г.: Приказ Минздрава РФ № 960 от 5 октября 1974 г абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования).. « Об унификации клинических лабораторных методов исследований» п. 2.1.1. ( Определение гемоглобина крови гемиглобинцианидным методом с применением ацетонциангидрина,М.,1974, 29 -34).

Основные достоинства гемиглобинцианидного метода:

- HbCN является стабильным производным Hb, и все имеющиеся в крови формы Hb, кроме сульфогемоглобина, могут быть быстро и количественно превращены в HbCN;

- спектр поглощения HbCN имеем максимум при длине волны = 540 нм, поэтому достаточная точность анализа возможна при измерении оптической плотности на фотометрах даже с неинтерференционными светофильтрами;

- растворы HbCN строго подчинены закону Ламберта –Бера при λ = 540 нм в широком диапазоне концентраций;

- калибровочный раствор HbCN устойчив в течение нескольких лет.

Калибровочный раствор гемиглобинцианида.

Международный калибровочный раствор HbCN готовится от имени ICSH абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). с относительной погрешностью, не превышающей 0,2%, и используется для аттестации коммерческих калибровочных растворов. Требование к пределу допустимого значения систематической погрешности при определении концентрации гемоглобина в коммерческих калибровочных растворах ≤ ± 2% по сравнению с Международным калибровочным раствором.

Гемихромный метод определения гемоглобина.

В настоящее время для определения гемоглобина в крови разработан новый колориметрический метод, не содержащий в составе реагентов цианистых соединений и получивший название гемихромного.

Принцип гемихромного метода.

Принцип гемихромного метода основан на переводе всех форм гемоглобина в одну – гемихром ( HbChr). При взаимодействии Hb с трансформирующим раствором происходит его превращение в окисленную низкоспиновую форму – гемихром, имеющую красноватый цвет, интенсивность которого прямо пропорциональна концентрации абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). Hb в пробе.

Трансформирующие реагенты.

Для перевода Hb в HbChr имеется несколько трансформирующих реагентов, отличающихся по составу:

- четвертичные аммониевые основания с поверхностноактивными веществами (ПАВ): т- октилфеноксиполиэтокси-этанол, полигидроксиаурилэтиловый эфир, с торговым названием Triton X-100 и Brij-35 соответственно;

- соли жирных кислот ( С14-С20) с феррицианидом калия и ЭДТА в трис-буфере;

- натрия додецилсульфат (SDS);

- другие агенты, не содержащие цианидов.

Из перечисленных трансформирующих реагентов лучшим является SDS. Максимальная скорость превращения Hb в HbChr отмечена именно при его взаимодействии с SDS. Полное превращение Hb происходит в пределах 5 минут. Высокая скорость реакции позволяет использовать данный метод в качестве экспресс-метода и применять для определения Hb при абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). неотложных состояниях.

Калибровочный раствор гемихрома.

До последнего времени в практике гемхромного метода отсутствовали калибровочные растворы гемихрома. Концентрацию Hb в крови определяли по разному: по коэффициенту молярной экстинкции, который по данным различных авторов, находится в пределах 9,86 – 10,45; по калибровочным растворам различного состава, но не гемихрома; по контрольному раствору гемоглобина, аттестованному с высокой степенью точности.

Приказом Минздрава РФ № 45 от 07.02.2000г. «О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения Российской Федерации» не рекомендовано использовать контрольные растворы Hb в качестве калибровочного раствора.

Контрольные растворы Hb не правомочно использовать по следующим причинам: с контрольным раствором необходимо проводить все операции, предусмотренные методикой абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). определения Hb, вследствие чего неизбежны ошибки при его разведении; его невозможно использовать для калибровки приборов, так как это не готовый раствор HbCHr, а проба крови, требующая соответствующей обработки и подготовки.

В 1998 г. Пупковой В.И. с соавторами разработан, а в последжствии запатентован и впедрен в практику набор реагентов для определения Hb гемихромным методом, в состав которого входит концентрат SDS (транформирующий раствор) и калибровочный раствор гемихрома.

Набор зарегистрирован в Российской Федерации и внесен в государственный реестр медицинских изделий.

Контрольные растворы гемоглобина.

Использование калибровочных растворов позволяет точно определить концентрацию гемоглобина в крови, если при анализе не было допущено погрешности. Возможные абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). погрешности анализа можно выявить при внутрилабораторном и межлабораторном контроле качества с помощью контрольных растворов гемоглобина. Контрольные растворы гемоглобина – это высокоочищенные имитаторы крови человека, не содержащие примесей, искажающих результаты анализа.

Наличие наборов реагентов для определения гемоглобина в крови: трансформирующего реагента, калибровочных растворов гемихрома и контрольных растворов гемоглобина обеспечивает возможность получения результатов с погрешностью, не превышающей ±2%.

Основные достоинства гемихромного метода:

· гемихром – стабильное производное гемоглобина, и все имеющиеся в крови формы гемоглобина могут быть быстро и количественно превращены в HbChr;

· максимум спектра поглощения HbChr вблизи λ = 540 нм (533 нм), поэтому достаточная точность анализа может быть достигнута при измерении оптической плотности на фотоэлектроколориметрах абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования).;

· растворы HbChr строго подчинены закону Ламберта-Бера при λ = 540 нм в широком диапазоне концентраций;

· калибровочный раствор HbChr устойчив в течение 1,5 лет;

· транформирующий реагент не ядовит и безвреден; в его составе не содержится цианистых и других токсичных соединений;

· молярный коэффициент экстинкции HbChr при λ = 540 нм равен 10,16.

Сравнительная характеристика наборов для определения гемоглобина двумя вышеописанными методами приведена в таблице 3.

Таблица 3

Сравнение основных характеристик наборов

для определения гемоглобина гемиглобинцианидным

и гемихромным методами анализа.

№ п/п П о к а з а т е л и Гемиглобинцианидный метод Гемихромный метод
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Измерение оптической плотности при длине волны, нм Линейная область измерения, г/л Чувствительность, г/л Соотношение «реагент/проба» Коэффициент абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). вариации, % Температура проведения анализа, 0С Срок годности трансформирующего раствора Время анализа Наличие в составе набора цианистых соединений 30 – 200 251:1 2,0 18 – 25 3 мес 20 мин да 30 – 200 251:1 2,0 18 – 25 6 мес 5 мин нет

Согласно полученным при сравнении данным, гемихромный метод анализа по правильности, воспроизводимости, чувствительности и требованиям к выполнению сравним с гемиглобинцианидным методом, а по скорости проведения анализа и срокам годности трансформирующего раствора даже превосходит его.

Трактовка результатов.

Нормальные значения концентрации гемоглобина в зависимости от пола и возраста приведены в таблице 2 Приложения.

Средними нормальными значениями для здоровых взрослых людей являются концентрации гемоглобина для мужчин 130 – 160 г/л; у женщин 120 – 140 г/л.

Данный показатель подвержен физиологическим колебаниям. Так, в течение абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). дня концентрация гемоглобина снижается на 10% в промежутке времени от 17 до 7 часов утра, а также после еды. Снижение концентрации на 6% наблюдается при взятии крови в положении лежа. Незначительное, но диагностически значимое снижение наблюдается у мужчин в возрасте 65 – 74 лет.

Факторы и состояния, приводящие к снижению гемоглобина:

· все виды анемий, связанных: а) с кровопотерей; б) с нарушением кроветворения; в) с избыточным гемолизом;

· гипергидратация;

· у курильщиков (наличие в крови повышенного содержания карбоксигемоглобина [HbCO], не способного к трансформации в гемиглобинцианид или гемихром).

Факторы и состояния, приводящие к повышению гемоглобина:

· первичные эритроцитозы (эритремия, полицитемия);

· вторичные эритроцитозы (дегидратация, гипоксические, дизэритропоэтические и др.);

· хроническое химическое воздействие нитритов, сульфаниламидов абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования)., вызывающих формирование мет- и сульфогемоглобина.

После первичного выявления с целью дифференциального диагноза анемия должна быть охарактеризована по следующим признакам.

1. Степень насыщения эритроцитов гемоглобином. Данный признак оценивается по следующим показателям:

а) МCН (Mean Corpuscular Hemoglobin = среднее содержание гемоглобина в эритроците), показатель, который характеризует абсолютное весовое содержание гемоглобина в одном эритроците в пикограммах (1 пг = 10-9 мг = 10-12 г). Его определяют путем деления концентрации гемоглобина в 1 л на число эритроцитов в том же объеме:

Hb (г/ л)

МСН =

RBC (1012/л)

где RBC - количество эритроцитов в 1 л крови.

Пример: концентрация гемоглобина в крови равна 120 г/л (или 120 х 1012 пг), количество эритроцитов – 4,0 х 1012/л.

МСН = 120/4,0 = 30 пг

В абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). современных гематологических автоматах этот показатель определяют расчетным путем.

Трактовка результатов.

Среднее содержание гемоглобина в эритроците в норме отражено в таблице 3 Приложения.

Факторы и состояния, приводящие к снижению МСН

· гипохромные и микроцитарные анемии (железодефицитные, талассемии, анемии хронических заболеваний);

· анемии при злокачественных опухолях.

Факторы и состояния, приводящие к повышению МСН

· гиперхромные анемии (например, мегалобластические);

· анемии при заболеваниях печени;

· гипотиреоз

· прием контрацептивов, цитостатиков, противосудорожных препаратов.

МСН самостоятельного значения не имеет и всегда соотностится с результатами MCV, MCHC и цветного показателя.

б) МСНС (Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration = cредняя концентрация гемоглобина в эритроците), отражает степень насыщения эритроцитов гемоглобином в процентах. Его вычисляют путем деления концентрации абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). гемоглобина (в граммах на 1 дл) на показатель гематокрита (в процентах):

Hb ( г/ дл )

МСНС =

Ht (%)

Пример: концентрация гемоглобина в крови 120 г/л ( или 12 г/ дл), гематокрит 40%.

12 г/дл

МСНС = х 100% = 30%

40 %

Трактовка результатов.

МСНС используют для дифференциальной диагностики анемий по признаку насыщения эритроцитов гемоглобином. Нормальные значения МСНС в зависимости от пола и возраста приведены в таблице 4 Приложения.

Факторы и состояния, приводящие к снижению МСНС

· патологическое отставание синтеза гемоглобина от ско

· рости образования эритроцитов с формированием абсолютной гипохромии эритроцитов. (например, железодефицитная анемия, талассемия);

· непропорционально большое увеличение объема эритроцитов по сравнению с увеличением его насыщения гемоглобином (может встречаться при макроцитарных и особенно мегалобластических анемиях (рисунок 3)

Факторы и состояния абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования)., приводящие к повышению МСНС

· гиперхромные анемии;

· гиперосмолярные нарушения водно-электролитного баланса.

в) цветовой показатель (ЦП) отражает относительное содержание гемоглобина в одном эритроците. Для вычисления цветового показателя пользуются следующей формулой:

X Hb • N эр

ЦП = , где

NHb • X эр

X Hb – найденное количество гемоглобина; NHb – нормальное количество гемоглобина; X эр – найденное количество эритроцитов; N эр – нормальное количество эритроцитов.

Если принять во внимание, что в норме в 1 л крови содержится в среднем 167 г гемоглобина и 5 • 1012 эритроцитов, то формула принимает вид:

XHb • 5 • 1012 XHb • 3 • 1010

ЦП = =

X эр • 167 X эр

Найденное число эритроцитов (X эр) обычно выражается числом клеток, умноженным на 1012, поэтому по упрощенной методике ЦП абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). можно определить так:

3 • Hb (г/л)

ЦП =

первые три цифры цисла эритроцитов

Пример: количество эритроцитов равно 4,5 • 1012/л; концентрация гемоглобина 140 г/л.

ЦП = (3 • 140)/450 = 420/450 = 0,93

Трактовка результатов.

У здоровых людей цветовой показатель находится в пределах 0,85 – 1,05.

Факторы и состояния, приводящие к снижению ЦП:

· уменьшение объема эритроцитов (микроцитоз);

· ненасыщенность нормальных эритроцитов гемоглобином.

Факторы и состояния, приводящие к повышению ЦП:

· отставание деления клеток эритроидного ростка от нормального синтеза гемоглобина, всегда сочетается с макроцитозом.

Гипохромные анемии характеризуются первичным нарушением образования гемоглобина, по сравнению с образованием эритроцитов. В результате возникает их основной лабораторный признак: значительное снижение количества гемоглобина в единице объема крови при нормальном или слабо сниженном числе эритроцитов абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования).. Отражением этих изменений является сочетанное снижение МСН, МСНС, цветного показателя.

2. Размер эритроцитов. Данный признак оценивается по следующим показателям:

а)вид эритроцитов в мазке– обнаружение признаков анизоцитоза (различный размер эритроцитов в одном препарате) с учетом преобладания или наличия микро- или макроформ эритроцитов (рисунок 7). Указывается в бланке анализа крови (напр.: «анизоцитоз, микроцитоз»), степень оценивается в крестах. При этом каждый крест означает примерно 25% клеток (например, «макроцитоз +++» означает наличие в препарате крупных эритроцитов в количестве примерно 75%). В норме считается допустимым наличие в мазке не более 25% эритроцитов большего или меньшего, чем в норме диаметра (анизоцитоз +).

Рисунок 7. Вид эритроцитов в мазке при железодефицитной анемии: микро- анизоцитоз, пойкилоцитоз абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). эритроцитов.


б)средний диаметр эритроцита, мкм– определяется автоматически с помощью эритроцитометрии (подсчитывается % клеток каждого диаметра, умножается на диаметр в мкм, произведения суммируются и делятся на 100 – количество измеренных эритроцитов). Результаты могут быть выражены графически в виде эритроцитометрической кривой Прайс-Джонса. При этом по оси абсцисс откладывают размеры эритроцитов, а по оси ординат – количество эритроцитов данного диаметра. Современные гематологические анализаторы вычерчивают кривую Прайс-Джонса автоматически под наименованием гистограмма эритроцитов или RBC Histogram (рисунок 8).

Рисунок 8. Гистограмма эритроцитов в норме.

в) MCV(Mean Corpusculare Volume = средний объем эритроцита), мкм3 – вычисляют путем деления гематокрита ( в мкм3) на общее число эритроцитов в 1 мкл:

Ht абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). ( мкм3)

МСV =

RBC ( 10 6 / мкл)

Этот показатель выражают в кубических микрометрах (мкм3), или в фемтолитрах ( фл).

Пример: гематокрит составляет 42% ( или 0,42 мкл). Общее число эритроцитов 4,5 х 1012/л ( или 4,5 х 106 мкл). Поскольку 1 мкл = 109 мкм3

0,42 х 109 мкм3 0,42 х 103 420

МСV= = = = 93 мкм3(фл)

4,5 х 106/ мкл 4,5 4,5

Практически для вычисления среднего объема эритроцита необходимо значение гематокрита в % увеличить в 10 раз и разделить на число миллионов эритроцитов в 1 мкл.

В некоторых моделях современных гематологических счетчиков осуществляется автоматическое измерение объема каждого эритроцита. Таким образом, значение МСV в этих приборах представляет собой среднюю величину объема всех измеренных эритроцитов.

Трактовка результатов.

В норме средний объем эритроцита составляет от 80 до 100 фл. Эти абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). значения МСV характерны для нормоцитов. Если величина МСV меньше 80 фл, говорят о микроцитозе, если больше 100 фл – о макроцитозе.

Уменьшение показателя МСV меньше 80 фл встречается при микроцитарных анемиях (железодефицитных, сидеробластической, талассемии) и анемиях, которые могут сопровождаться микроцитозом ( гемоглобинопатии, нарушение синтеза порфиринов).

Значения МСV от 80 до 100 фл характерны для нормоцитарных анемий (острой постгеморрагической, апластической, гемолитической), а также для анемий, сопровождающихся нормоцитозом (железодефицитные анемии в регенераторной фазе, миелодиспластические синдромы).

Увеличение МСV больше 100 фл встречается при макроцитарных и мегалобластических анемиях, обусловленных дефицитом витамина В12 и фолиевой кислоты, а также при различных патологических состояниях, сопровождающихся макроцитозом ( гемолитические анемии, болезни печени и т.д.).

г) RDW абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования).(red cell distribution width = вариабельность объема эритроцитов) – важнейший современный показатель анизоцитоза. Расчет этого показателя становитстя возможным благодаря использованию современных гематологических анализаторов, позволяющих автоматически опрелять объем каждого измеряемого эритроцита.

Показатель RDW рассчитывается как коэффициент вариации среднего объема эритроцитов по формуле:

SD • 100%

RDW =

MCV

где SD – стандартное отклонение объема эритроцитов от среднего значения; MCV – средний объем эритроцитов.

а

б

Рисунок 9. Сравнительная характеристика показателей размера эритроцитов а) в норме; б) при железодефиците: расширение гистограммы эритроцитов, увеличение показателя RDW.

Трактовка результатов.

В норме показатель RDW не превышает 11,5 – 14,5%.

Увеличение показателя свидетельствует о более или менее выраженной гетерогенности популяции эритроцитов и встречется практически при абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). всех типах анемий, а также при миелодиспластических синдромах, костномозговой дисплазии, метастазах опухолей в костный мозг.

RDW целесообразно анализировать вместе с гистограммой эритроцитов и величиной MCV (рисунок 9).

Особое значение оценка RDW приобретает при микроцитарных анемиях, сопровождающихся уменьшением MCV менее 80 фл. При этом значительное увеличение RDW характерно для железодефицитных и сидероахрестических анемий, а нормальные или слабоизмененные чаще встречаются при талассемии и АХЗ.

3. Степень регенераторности костного мозга.

Данный признак оценивается по количеству в периферической крови ретикулоцитов.

Ретикулоциты – молодые эритроциты, образующиеся после потери нормобластами ядер. При нормальном эритропоэзе ретикулоциты в основном созревают в костном мозге в течение 2 – 3 суток, около 24 часов они находятся в кровеносном абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). русле и превращаются там в зрелые эритроциты. Если ретикулоциты попадают в кровь несозревшими, то время циркуляции увеличивается до 3 суток. Ретикулоциты являются отражением эритропоэтической активности костного мозга, высвобождения из костного мозга большого количества юных клеток.

Характерной особенностью ретикулоцитов является наличие в цитоплазме зернисто-сетчатой субстанции, представляющей собой агрегированные рибосомы и митохондрии. Эта агрегация представляет собой артефакт, возникающий при суправитальной (без предварительной фиксации) окраске клеток специальными красителями. Зернисто-сетчатая субстанция в различных видах ретикулоцитов отличается полиморфизмом. У самых молодых ретикулоцитов субстанция обильная и имеет форму густого клубка. В более зрелых клетках она выявлется в виде сеточки, отдельных нитей, зерен (рисунок 10).

Рисунок 10. Ретикулоциты абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). периферической крови.

В мазках, окрашенных по обычным гематологическим методикам, ретикулоциты полихроматофильны (окрашиваются как кислыми, так и основными красителями) и приобретают серовато-розовый цвет. Определить количество ретикулоцитов можно только при микроскопии специально окрашенных мазков.

Унифицированным методом является подсчет количества ретикулоцитов после их непосредственно на стекле и в пробирке.

Принцип метода – суправитальная окраска бриллиант-крезиловым синим выявляет зернисто-сетчатую субстанцию ретикулоцитов.

После окраски в мазках эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-сетчатая сустанция – в синевато-фиолетовый цвет. Подсчитывается не менее 1000 эритроцитов (наибольшая точность достигается при подсчете 2000 – 3000 клеток), отмечая среди подсчитанных количество клеток, содержащих зернисто-сетчатую субстанцию.

Количество подсчитанных ретикулоцитов выражают на абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). 1000 или на 100 эритроцитов.

Трактовка результатов.

У здоровых людей число ретикулоцитов составляет 2 – 12 ‰ или 0,2 – 1,2% от числа эритроцитов.

Норморегенераторность костного мозга при анемии выражается повышением числа ретикулоцитов. Наблюдается при незатронутости костного мозга патологическим процессом (гемолитические анемии, острые кровопотери).

Гипорегенераторность костного мозга при анемии проявляется нормальным числом ретикулоцитов при снижении числа эритроцитов.

Арегенераторность является прогностически неблагоприятным признаком, проявляется снижением числа ретикулоцитов, обнаруживается при апластических анемиях.

Гипохромные анемии являются гипорегенераторными (гипопластическими) – проявляются нормальным или сниженным количеством ретикулоцитов на фоне анемии. Причина – нарушения трофики костного мозга, описанные как причина микроцитоза.

4. Тип костномозгового кроветворения. По данному признаку гипохромные анемии относятся к категории нормобластические (характеризуются абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования). нормальной морфологией эритроидных клеток-предшественников костного мозга).

Метод выявления сидероцитов и сидеробластов в препаратах крови и костного мозга

Сидероциты и сидеробласты – это эритроциты и эритробласты, содержащие в цитоплазме негемовое железо в составе ферритина и гемосидерина.

Принцип метода. Использование реакции на берлинскую лазурь с образованием внутриклеточных гранул синего цвета.

Реактивы. 1. 2% раствор железосинеродистого калия [K4Fe(CN6)]; 2. 0,1 н. раствор соляной кислоты: 8,2 мл концентрированной HCl доводят дистиллированной водой до 1 л; 3. 0,1% раствор сафранина; 4. Метиловый спирт.

Ход исследования. Мазки крови или костного мозга фиксируют метанолом в течение 10-20 минут и высушивают на воздухе. Помещают в смесь равных частей растворов 1 и 2 при температуре 50-56 0С (на водяной бане абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования).) на 15-20 минут. Промывают проточной водой в течение 10-15 минут и ополаскивают дистиллированной водой. Докрашивают раствором сафранина 3-5 секунд.

Сидеробласты и сидероциты содержат в цитоплазме гранулы синего цвета диаметром 0,2 – 1,5 мкм (рисунок 11).

Рисунок 11. Сидеробласты: А) схема; Б) вид в мазке.

Нормальные величины. В периферической крови количество сидероцитов не превышает 1,1%, составляя в среднем 0,60±0,04%; в костном мозге их несколько больше – 0,2-2,1% (в среднем 0,90±0,09%). Количество сидеробластов в костном мозге составляет 23,7±2,4%.


documentaouimtd.html
documentaouiudl.html
documentaoujbnt.html
documentaoujiyb.html
documentaoujqij.html
Документ абораторная диагностика анемического синдрома (гематологические и цитохимические методы исследования).